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純化水標準

時間:2013-11-05 09:23來源:未知 作者:admin 點擊:
本法用于檢查制藥用水中有機碳總量,用以間接控制水中的有機物含量。
1.質量標準
1.1 概述:本品為蒸餾法、離子交換法、反滲透法或其他適宜的方法制得供藥用的水,不含任何附加劑。
1.2 純化水的企業質量標準如下:
序號 控制項目 標 準
EP6
1 微生物限度 ≤100CFU/ml
2 1.TOC ≤0.5mg/l
2.易氧化物 粉紅色不消失
3 電導率
 
4 硝酸鹽 ≤0.2ppm
5 重金屬 ≤0.1ppm
6 細菌內毒素 ≤0.25IU/ml
 
檢驗規程
2.1 微生物監測:在生產和貯存過程中,應采取適當的措施來確保有效控制或監測水中的微生物總數。設置適當的警戒限與行動限可用于發現不利的趨勢。正常條件下,可用標稱值不大于0.45 μm的微孔濾膜過濾,然后使用R2A瓊脂在30-35℃培養至少5天后,計數微生物總數,其合適的行動限是100CFU/ml。檢測所用樣品量的選擇與期望結果有關。
R2A培養基配方
酵母提取物              0.5g
示蛋白胨                0.5g
酪蛋白水解物            0.5g
葡萄糖                  0.5g
淀粉                   0.5g
磷酸氫二鉀             0.3g
無水硫酸鎂             0.024g
丙酮酸鈉               0.3g
瓊脂                   15.0g
純化水                 1000ml
調整PH值,使得R2A瓊脂滅菌后的PH值為7.2±0.2。使用高壓鍋,121°C下高壓滅菌15分鐘。
R2A瓊脂促生長試驗
—測試菌株的制備:使用標準菌懸液或按表0008.-1中指定的方法制備。菌株傳代次數不得超過5代,并采用適當的菌種保藏技術以保證所使用菌株的生物學特性。每種菌株別按表0008.-1中所描述的方法培養。使用pH7.0的氯化鈉蛋白胨緩沖液或pH7.2的磷酸鹽緩沖液制備測試菌懸液。制備好的菌懸液應在2小時內使用,當貯存在2-8 °C條件下,24小時內使用。也可用另外一種方法:制備并稀釋新制備的枯草芽胞桿菌營養細胞的懸浮液,得到一個穩定的孢子懸液,然后使用適當體積的此胞子菌懸液進行接種測試。此穩定的胞子懸液可以在2-8 °C保存一定的時間而不失效。
—促生長試驗:測試每批已制備好的培養基以及采用脫水培養基制備或按指定的成分制備的培養基。
分別將表0008.-1中指定的不超過100CFU的菌懸液(或孢子懸液)接種在R2A瓊脂上,按表中指定的條件進行培養。對于新制備的細菌培養液,微生物的生長必須與先前測試過或者已經認可的培養基具有可比性。
表008.-1—R2A瓊脂促生長試驗
微生物 測試菌株的制備 促生長
綠膿桿菌
如:
ATCC   9027
NCIMB  8626
CIP     82.118
NBRC  13275
胰酪胨大豆肉湯培養基或
胰酪胨大豆肉湯培養液
30-35℃
18-24小時
 
R2A培養基
≤10CFU/100ml
30-35℃
≤3天
枯草芽孢桿菌
如:
ATCC   6633
NCIMB  8054
CIP     52.62
NBRC  3134
胰酪胨大豆肉湯培養基或
胰酪胨大豆肉湯培養液
30-35℃
18-24小時
R2A培養基
≤10CFU/100ml
30-35℃
≤3天
 
2.2.1總有機碳
本法用于檢查制藥用水中有機碳總量,用以間接控制水中的有機物含量。總
有機碳檢查也被用于制水系統的流程控制,如監控凈化和輸水等單元操作的效
能。
通常采用蔗糖作為易氧化的有機物、1,4-對苯醌作為難氧化的有機物,按規
定制備各自的標準溶液,在總有機碳測定儀上分別測定相應的響應值,以考察所
采用技術的的氧化能力和儀器的系統適用性。
對儀器的一般要求 有多種方法可用于測定總有機碳。對這些技術,只要符
合下列條件均可用于水的總有機碳測定:
1、總有機碳測定技術應能區分無機碳(溶于水中的二氧化碳和碳酸氫鹽分
解所產生的二氧化碳)與有機碳(有機物被氧化產生的二氧化碳),并能排除無
機碳對有機碳測定的干擾。
2、應滿足系統適用性試驗的要求。
3 、應具有足夠的檢測靈敏度( 最低檢出限為每升含碳等于或小于
0.05mg/L)。
采用經校正過的儀器對水系統進行在線監測或離線實驗室測定。在線監測可
方便地對水系統進行實時測定及實時流程控制;而離線測定則有可能帶來許多問
題,例如被采樣、采樣容器以及未受控的環境因素(如有機物的蒸汽)等污染。
由于水的生產是批量進行或連續操作的,所以在選擇采用離線測定還是在線測定
時 ,應由水生產的條件和具體情況決定。
總有機碳檢查用水 應采用每升含總有機碳低于0.10mg,電導率低于1.0
μS/cm(25℃)的高純水。所用總有機碳檢查用水與制備對照品溶液及系統適用
性試驗溶液用水應是同一容器所盛之水。
玻璃器皿的預備 
用能除去有機物質的方法嚴格地清洗玻璃器皿。最后,用總有機碳檢查用水潤洗。
對照品溶液的制備
蔗糖對照品溶液  取經105℃干燥三小時后,加總有機碳檢查用水溶解并稀釋制成每升中約含1.19mg 的溶液(每升含碳0.50mg)。
1,4-對苯醌對照品溶液 取1,4-對苯醌對照品適量,精密稱定,加總有機碳檢查用水溶解并稀釋制成每升中含0.75mg 的溶液(每升含碳0.50mg)。
供試溶液
離線測定 由于水樣的采集及輸送到測試裝置的過程中,水樣很可能遭到污染,而有機物的污染和二氧化碳的吸收都會影響測定結果的真實性。所以,測定的各個環節都應十分謹慎。采樣時應使用密閉容器,采樣后容器頂空應盡量小,并應及時測試。所使用的玻璃器皿必須嚴格清洗有機殘留物,并用總有機碳檢查用水做最后淋洗。
在線測定 將總有機碳在線檢測裝置與制水系統連接妥當。取水及測定系統都須進行充分的清洗。
系統適用性試驗 取總有機碳檢查用水,蔗糖對照品溶液和1,4-對苯醌對照品溶液分別進樣依次記錄儀器總有機碳響應值。按下式計算,以百分數表示的響應效率應為85%~115%。
100[(rss-rw)/(rs-rw)]
式中 rw —為總有機碳檢查用水的空白響應值;
rs —為蔗糖對照品溶液的響應值;
rss —為1,4-對苯醌對照品溶液的響應值。
測定法 取供試制藥用水適量,按儀器規定方法測定。記錄儀器的響應值rU,除另有規定外,供試制藥用水的響應值應不大于rs-rw  。
    此方法可同時用于預先經校正并通過系統適用性試驗的在線或離線儀器操作。這種由在線或離線測定的水的質量與水樣在水系統中的采集位置密切相關。
    應注意水樣的采集位置必須能真實反映制藥用水的質量。
2.2.2 易氧化物質
取本品100ml,加稀硝酸10ml及0.02M高錳酸鉀滴定液0.1ml,煮沸5分鐘,溶液仍然顯粉紅色。
2.3  電導率:按下列條件進行在線或離線電導率測試。
設備:電導池。
一個適當材料(如不銹鋼)的電極;
電池常數:電極常數一般由供貨商校正。在合適的時間間隔,使用確定的標準溶液(電導率低于1500uS.cm-1)校正或和另外一個具有校正好參數的電導率儀作比較。如果測定值和標準值的誤差在2%的范圍內,便可確定校正常數。否則,重新矯正。
電導率儀:準確度為0.1 μS·cm−1或更低的范圍;
系統校正(電導池和電導率儀):
一個或一個以上的已經過鑒定的參照溶液;
準確度:在被測電導率加0.1 μS·cm−1的3%以內;
電導率儀校正:測量所使用的每一個范圍都應被校正,拆下電導池之后,使用被鑒定的精密電阻器,或帶有一個不確定度不超過鑒定值0.1%的同等設備。如果在線電導池不能被拆下,則系統校正應根據一個已被校正過的電導率-測量設備進行,此電導率-測量設備帶有一個電導池,放在將要被校正的電導池附近,在水流下進行校正。
溫度測量:誤差± 2 °C
操作程序:在沒有溫度補償下測試電導率,同時記錄測試溫度。在適當的確認之后溫度-補償測量可能被執行。在所記錄的溫度下測得的電導率不超過表0008.-2中的值則被檢測水的電導率符合要求。沒有在表0008.-2中列出的溫度,可以其上下相鄰兩點之數據用內插法計算最大允許電導率。
溫度(℃)                                             電導率(uS.cm-1
0                                                                                                  2.4
10                                                                                                   3.6
20                                                                                                   4.3
25                                                                                                   5.1
30                                                                                                 5.4
40                                                                                                  6.5
50                                                                                                  7.1
60                                                                                                   8.1
70                                                                                                   9.1
75                                                                                                    9.7
80                                                                                                     9.7
90                                                                                                    9.7
100                                                                                                10.2
 
 
2.4 硝酸鹽含量
取本品5ml置試管中,于冰浴中冷卻,加100g/l氯化鉀溶液0.4ml與0.1%二苯胺溶液0.1ml,邊搖邊滴加無氮的硫酸5ml,搖勻,將試管于50℃水浴中放置15分鐘,溶液產生的藍色與標準硝酸鹽溶液(2 ppm NO3)0.5ml,加無硝酸鹽的水4.5ml,在同一時間用同一方法處理后的顏色比較,不得更深。
2.5鋁含量
供試液:取本品400ml,加10mlpH6.0的醋酸鹽緩沖液及100ml蒸餾水,混合。
參照溶液:取2ml鋁標準溶液(2 ppm Al),加10mlpH6.0的醋酸鹽緩沖液及98ml蒸餾水,混合。
空白溶液:取10mlpH6.0的醋酸鹽緩沖液及100ml蒸餾水,混合。
將上述三種溶液按2.4.17項下描述的方法進行比較測試。
測試溶液:將20ml的供試溶液置于分液漏斗中,加入10ml的溶液(該溶液配制為:每升氯仿含有5克羥基喹啉)萃取。用氯仿將上述溶液稀釋到50.0ml。
 做一個平行樣。
    用上述的參照溶液,根據上述方法制備成標準溶液。
    用上述的空白溶液,根據上述方法制備成空白溶液。
    利用392nm的激光波長和濾波通道波長位于518nm處的二次過濾器或同一波長下的單色光鏡,檢測測試溶液(I1),標準溶液(I2),空白溶液(I3)的熒光強度。
    測試溶液的I1-I3值不能高于標準溶液的I2-I3.
2.6 重金屬
    取本品200ml,加0.1M硝酸滴定液0.15ml,置一玻璃蒸發皿中水浴加熱直至體積減少至20ml,放冷后,取此溶液12ml按測試A進行。
參照溶液:取10ml標準鉛溶液(1ppm Pb),加0.1M硝酸滴定液0.075ml,按測試A進行。
空白溶液:取0.1M硝酸滴定液0.075ml,按測試A進行。
測試A:
    每個溶液中,加入PH3.5的緩沖液12ml。混勻,加入硫代乙酰胺試劑1.2ml,立刻混勻,2分鐘后進行測定。如果參照溶液和空白溶液相比較,沒有呈淺褐色的話,該測試無效。如果供試液的顏色不深于參照溶液,該供試液符合要求。
如果測試結果很難判定,利用膜過濾(孔徑 3um,見圖2.4.8-1,不需要預濾器)處理溶液。緩慢進行勻速過濾,對活塞加上適當的常壓。過濾不同溶液所得的濾液,比較其斑點。
2.7細菌內毒素
本法利用鱟試劑(從鱟——Limuluspolyhemus或 Tachypleus tridentatus——血細胞提取物(amoebocyte lysate)制備而來)檢測由革蘭氏陰性菌產生的細菌內毒素或對內毒素進行定量。該檢查包括三種方法:一為凝膠法,系利用鱟試劑與內毒素產生凝集反應的原理;第二種為濁度法(基于內源性底物斷裂后,產生的濁度變化);最后一種為顯色法(得到的肽-呈色基團復合物斷裂后,檢測反應混合物的色度)。
這一章闡述了下面6種方法:
方法A:凝膠法:限度試驗
方法B:凝膠法:半定量試驗
方法C:動態濁度試驗
方法D:動態顯色法
方法E:終點顯色法
方法F:終點濁度法
檢測時,可用6種方法的任一種進行試驗。當測定結果可疑或有爭議時,除非另有規定,以專論中的方法A的測定結果為準。
試驗操作過程應防止內毒素的污染。
儀器
所有的玻璃器皿及由其他耐熱材料制成的器皿需用已驗證的工藝在熱烘箱內進行去熱原處理。去熱原時,常用的最小時間和溫度設置分別為30分鐘和250℃。若使用塑料器械,如微孔板和微量進樣器配套的吸頭等,它們必須標明無內毒素并確對試驗無干擾。
注:這一章中,“管”的意思包括其他任何反應容器,如微孔板中的孔。
內毒素儲備標準溶液的制備
用內毒素標準品制備內毒素儲備標準溶液;所用的內毒素標準品必須先用國際標準品校準,如內毒素標準BRP
內毒素以國際單位(IU)表示。IU的換算見國際衛生組織公布的國際標準。
注:一國際單位(IU)內毒素相當于一個內毒素單位(E.U.)。
根據包裝說明書上的標準和內毒素儲備標準溶液的標簽上關于制備和貯存的說明。
內毒素標準溶液的制備
充分混合內毒素儲備標準溶液后,用細菌內毒素試驗檢查用水(BET檢查用水)稀釋,制成適當的系列稀釋液,即得BET檢查用內毒素標準溶液。
得到的稀釋液應盡快使用,以免因吸附而導致活性損失。
供試品溶液的制備
除非另有說明,以BET檢查用水溶解或稀釋活性成分或藥品來制備供試品溶液。某些成分或藥品可能在其它的水溶液中溶解度更高。如有必要,調節待測溶液(或它的稀釋液)的pH值,使鱟試劑和供試品溶液的混合物的pH值在所選鱟試劑生產商的指定pH范圍內。一般要求供試品溶液的pH值范圍為6.0——8.0。可用鱟試劑生產商推薦的酸、堿或適當的緩沖溶液來調解pH值。酸或堿溶液須用BET檢查用水在去除內毒素的容器中配制。緩沖液必須經過驗證不含內毒素和干擾因子。
確定最大有效稀釋倍數
最大有效稀釋倍數(MVD)指可檢測出內毒素限值的供試品溶液的最大稀釋倍數。MVD按下列公式確定:
MVD = 內毒素限值×供試品溶液濃度/λ
內毒素限值:在劑量的基礎上,注射藥物的活性成分的內毒素限度為
K/M
K=人每公斤體重每小時最大可接受的內毒素劑量(EU/kg)
M=人用每公斤體重每小時的最大供試品劑量。
專論中,注射劑的活性成分的內毒素限度的單位有IU/ml、IU/mg、IU/生物活性單位等。
供試品溶液的濃度表示法:
-當內毒素限度以質量(IU/mg)表示時,用mg/ml表示濃度。
-當內毒素限度以(IU/ml)表示時,用ml/ml表示濃度。
-當內毒素限度以生物單位(IU/Unit)表示時,用Units/ml表示濃度。
λ=指凝膠法中鱟試劑的標示靈敏度,或指濁度法或顯色法使用的標準回歸曲線上最低點(IU/ml)的對應值。
凝膠法(方法A和B)
凝膠法系通過鱟試劑與內毒素產生凝集反應的原理來檢測或定量內毒素的方法。在標準條件下,可引起鱟試液凝集的內毒素的最低濃度即為鱟試劑的標示靈敏度。為確保試驗結果精確、有效,應根據預備試驗中的說明開展試驗,復核鱟試劑的標示靈敏度和試驗的干擾因素。
  1. 預備試驗
  • 鱟試劑的標示靈敏度復核試驗
靈敏度用IU/ml表示。應在鱟試劑用于檢查內毒素之前對靈敏度進行復核;復核試驗需要制備標示靈敏度λ的4支平行管。當使用新批號的鱟試劑或試驗條件發生了任何可能影響檢驗結果的改變時,應進行鱟試劑靈敏度復核試驗。
用BET檢查用水稀釋內毒素儲備標準溶液,制成2λ、λ、0.5λ和0.25λ四種濃度的標準溶液。
在每支試管中,分別混合等體積(通常為0.1mL)的鱟試液(lysate solution)和標準溶液。如使用的是裝有鱟試劑凍干粉末的西林瓶或安瓿,可向其中直接加入溶液。按照鱟試劑生產商的建議,將反應混合物孵育一段時間(通常在37±1℃下保溫60±2分鐘),在此過程中,不能振動試管。凝膠的完整性測試:如使用試管作為容器,先將試管從保溫箱中取出,再緩緩將試管倒轉1800。如果形成了堅實的凝膠,倒轉后凝膠不移位,此時將該項檢查的結果記錄為陽性。如未能形成堅實且不變形的凝膠,該項檢查的結果即為陰性。
僅在最低濃度的標準溶液的所有平行管的檢查結果均為陰性的情況下,試驗方為有效。
反應終點濃度指系列遞減的內毒素濃度中最后一個呈陽性結果的濃度。將終點濃度取對數,計算它們的平均值,再將平均值的結果取反對數,最后的表達式如下:
終點濃度的幾何平均值=lg-1(Σe/f)
Σe=所用系列溶液的終點濃度的對數值的和
f=平行管的數量
反應終點的濃度的幾何平均值即為鱟試劑靈敏度的測量值(IU/ml)。當終點濃度的幾何平均值在0.5λ至2.0λ之間時,可判定受試鱟試劑的標示靈敏度為λ,可用于內毒素的檢查。
  • 干擾因素試驗
按表2.6.14.-1制備溶液A、B、C、D。供試品的稀釋度不得超過MVD,且供試品溶液不能檢查出內毒素,具體操作見(1)預備試驗,(i)鱟試劑標示靈敏度的復核試驗項。
表2.6.14-1
溶液 內毒素濃度/配制內毒素的溶液 稀釋劑 稀釋倍數 稀釋后內毒素的濃度 平行管數
A 無/供試品溶液 4
B 2λ/供試品溶液 供試品溶液 1
2
4
8


0.5λ
0.25λ
4
4
4
4
C 2λ/BET檢查用水 BET檢查用水 1
2
4
8


0.5λ
0.25λ
2
2
2
2
D 0/BET檢查用水 2
A=經檢查無內毒素的溶液
B=干擾實驗用
C=鱟試劑標示靈敏度的對照品
D=陰性對照品(BET檢查用水)
根據(1)預備試驗下的(i)鱟試劑標示靈敏度的復核試驗項中列出的公式,計算B和C溶液的終點濃度的幾何平均值。
如試驗條件發生了任何可能影響到試驗結果的變化,須重新進行干擾因素試驗。
只有當溶液A和D的所有平行管中無反應、且溶液C的結果在復核的鱟試劑靈敏度范圍內時,試驗方有效。
經測定,如果溶液B的靈敏度在[0.5λ,2.0λ]間,可判定供試品溶液在該實驗條件下,對實驗無干擾;反之則判定供試品溶液對試驗能形成干擾。
若供試品溶液在小于MVD的稀釋倍數下對試驗有干擾,應將供試品溶液進行不超過MVD的進一步稀釋,再重復干擾試驗。使用靈敏度更高的鱟試劑進行內毒素的檢查時,因為靈敏度更高的鱟試劑能排除實驗的干擾因素,供試品的稀釋倍數也可適當放寬。
可通過其他適宜的方法(如過濾、中和、透析或加熱處理等)排除干擾。為確保所選擇的處理方法能有效地排除干擾且不會使內毒素失去活性,要使用預先添加了標準內毒素再經過處理的供試品溶液進行干擾實驗。
  1. 限度試驗(方法A)
  • 方法
按表2.6.14-2制備溶液A、B、C、D。實驗方法見(1)預備試驗的(i)鱟試劑標示靈敏度的復核試驗項。
表2.6.14-2
溶液 內毒素濃度/配制內毒素的溶液 平行管數
A 0/供試品溶液 2
B 2λ/供試品溶液 2
C 2λ/BET檢查用水 2
D 0/BET檢查用水 2
制備溶液A、B(供試品陽性對照),稀釋倍數不得超過MVD。按照(1)預備實驗,(ii)干擾因素實驗項下的說明開展實驗。溶液B、C(陽性對照)所含標準內毒素的濃度為鱟試劑標示靈敏度的兩倍。溶液D(陰性對照)為BET檢查用水。
  • 結果判斷
只有溶液B和C的平行管的試驗結果均為陽性、溶液D的平行管的試驗結果均為陰性時,試驗方有效。
溶液A的平行管的試驗結果均為陰性時,可判定供試品符合試驗的內毒素限度要求。
如溶液的平行管的檢查結果均為陽性時:
  • 如供試品的稀釋倍數為MVD,供試品不符合規定。
  • 如供試品的稀釋倍數小于MVD,應將供試品溶液稀釋至較大但不超過MVD的倍數,再次開展實驗。
若溶液A的兩個平行管中的一管為陽性,另一管為陰性,需進行復試。如復試中,溶液A的兩個平行管均呈陰性,可將供試品判為符合內毒素限度要求。
 
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